材料與儀器

胎牛血清或馬血清 青霉素 卡那霉素 霍亂毒索 地塞米松 EGF 羊催乳激素或鼠催乳激素 胰島素 部分精制的前列腺調(diào)理素或精制的前列腺調(diào)理素 I型膠原蛋白酶 大鼠
生長(zhǎng)培養(yǎng)液 鹽性培養(yǎng)液
Petri培養(yǎng)皿 手術(shù)剪 注射器和14-G插管 25ml Erlenmeyer燒瓶 金屬絲濾網(wǎng) 50ml錐形塑料離心管 尼龍濾網(wǎng) 24孔塑料培養(yǎng)板 振蕩水浴箱 離心機(jī) 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或Coulter計(jì)數(shù)器

步驟

1. 在無菌條件下，取出理想的前列腺葉，放入滅菌過的 60 mm Petri 培養(yǎng)皿（玻璃或塑料的，直徑為 60 mm）。
   
   2. 剪除前列腺葉的脂肪，然后稱重。
   
   3. 加入 2 ml 膠原蛋白酶（675 U/ml，用含有 100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 卡那霉素的 MSS 配制）。
   
   4. 用手術(shù)剪將前列腺葉剪成約 1 mm 大小的組織塊。組織塊應(yīng)小，足夠通過 14-G 插管。
   
   5. 用注射器和 14-G 插管將組織塊移于滅菌過的 25 ml Erlenmeyer 燒瓶，然后加入膠原蛋白酶，每 0.1 g 濕組織加入 1 ml。
   
   6. 置于振蕩水浴箱，在 37°C 條件下孵育 1 h 。
   
   7. 分 3 次用 14-G 插管吸出消化的細(xì)胞懸液，然后用孔徑為 1 mm 的金屬絲濾網(wǎng)（孔徑為1 mm，與 50 ml 錐形離心管配用）將細(xì)胞懸液濾入 50 ml 圓錐形塑料離心管，以除去碎片和未消化的組織。加入等量含有 5 % 胎牛血清或馬血清的 MSS，浸洗細(xì)胞懸液。
   
   8. 在 4°C 條件下離心（100 g，5 min），收集細(xì)胞。
   
   9. 用 5 ml 含有 5 % 血清的 MSS 混懸細(xì)胞，然后依次用孔徑為 250 μm 、150 μm、100 μm 和 40 μm 的尼龍濾網(wǎng)（與 50 ml 錐形離心管配用）過濾細(xì)胞懸液，并每次用 5 ml 含有 5 % 血清的 MSS 沖洗濾網(wǎng)。
   
   10. 通過離心收集細(xì)胞，然后用 5 ml WAJC404 培養(yǎng)液混懸細(xì)胞。
   
   11. 計(jì)數(shù)細(xì)胞，將細(xì)胞濃度調(diào)整至 4×106 個(gè)/ml。
   
   12. 將細(xì)胞接種于 24 孔板，每孔（面積約為 2 cm2）接種 50 μl 細(xì)胞懸液（含有 2×105 個(gè)細(xì)胞）。每孔內(nèi)有 1 ml WAJC404 培養(yǎng)液、10 ng/ml 霍亂毒素、1 μmol/L 地塞米松、10 ng/ml EGF、1 μg/ml 催乳激素、5 μg/ml 胰島素、10 ng/ml 前列腺調(diào)理素、100 U/m 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素。可按 McKeehan 等 [1984] 以及 Chaproniere 和 McKeehan [1986] 敘述的方法替代部分精制的前列腺調(diào)理素。
   
   13. 在 95 % 空氣和 5 % CO2 的濕潤(rùn)環(huán)境和 37°C 條件下培養(yǎng)。第 3 天和第 5 天換液。第 7 天細(xì)胞可能接近單層。
   

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)