實時熒光定量PCR實驗會產(chǎn)生大量實驗數(shù)據(jù)，一般可以用PCR儀自帶的軟件進(jìn)行收集、分析。但即使有了方便可靠的軟件，我們也需要對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行檢查、再分析，評估數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可靠性。

這需要三個基本的步驟。

第一步，查看擴(kuò)增曲線，有必要時調(diào)整基線和閾值。

Ct值由基線和閾值計算得來，所以他們的值對結(jié)果影響很大。軟件會給出1個默認(rèn)的基線和閾值，但不一定是最合適的，需要我們進(jìn)行手動調(diào)整。

首*行基線的調(diào)整。

一般范圍是循環(huán)數(shù)3～15，使得靶基因的擴(kuò)增信號大于背景噪聲。出現(xiàn)不正常的擴(kuò)增曲線，通常是因為設(shè)置了不正常的基線，需要對單個孔進(jìn)行設(shè)置。

比較好的做法是，基線的最小值（起始循環(huán)數(shù)）設(shè)置在背景噪聲的尾巴后，最大值（結(jié)束循環(huán)數(shù)）設(shè)置為擴(kuò)增起始點(diǎn)。

循環(huán)范圍在5個循環(huán)就可以，具體跟擴(kuò)增曲線的對數(shù)圖來設(shè)定。

擴(kuò)增曲線的對數(shù)圖是什么？下期告訴你